PCR技术需要的是DNA连接酶还是DNA聚合酶
Taq酶=DNA聚合酶(可耐72℃以上高温而不失活),核苷酸以母链为模版在引物(一段与母链前几个核苷酸配对的单核苷酸链,一般是含5-7核苷酸的核苷酸链)的作用下,由Taq酶(DNA聚合酶)帮助下合成子链,在这一过程中单核苷酸是在碱基互补配对的作用下自动连接于母链上的Tap酶作用就是将没有连接的磷酸二脂键连接上。
A、DNA连接酶和DNA聚合酶均能催化磷酸二酯键,A正确;
B、DNA连接酶作用对象是两个DNA片段,DNA聚合酶作用对象是脱氧核苷酸,B错误;
C、DNA连接酶不需要模板DNA,DNA聚合酶需要模板DNA,C错误;
D、DNA连接酶不用于PCR技术,DNA聚合酶可用于PCR技术,D错误。
PCR的原理是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5‘-3’)的方向合成互补链。
PCR最有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断。理论上,只要样本有一个病原体存在,PCR就可以检测到。
在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。
扩展资料
标准的PCR过程分为三步:
1、DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA。
2、退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
3、延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。
有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。
参考资料来源:百度百科-PCR
引物的功能是作为核苷酸聚合的起始点,引导DNA的合成。
能设定循环次数,及控制复制次数。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30~40次之间,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之增多。
dNTP混合物:提供DNA结构的基础元件,像房子的砖瓦;
引物:DNA聚合酶无法从无到有合成DNA,需要一个3‘羟基,引物就是这个作用;
TaqDNA聚合酶:DNA聚合酶的一种,耐高温,保持高活性,使得PCR得以进行几十个循环;
还有PCR缓冲液,为整个反应提供一个合适的环境。