我是高中生(至少三个月以前还是)所以我所说的你大概可以理解
PCR的意思是聚合酶链式反应,是一种扩增DNA的技术(就是复制DNA)
DNA复制其实很复杂,DNA聚合酶有一种特性,他只能把脱氧核糖核酸接到一段现有的DNA或RNA上,这样你就能明白了吧。第一个位置上的脱氧核糖核酸没办法弄到了。在人体内这个部分是由RNA聚合酶完成的,先由这个酶在基因的第一段复制出一小段RNA,然后再由DNA聚合酶在后面添上以后的DNA。这段RNA就叫RNA引物。等都填完后再由引物酶把这段RNA切掉换成DNA(这种做法有一个毛病,会引起5'端缩短,不过你不需要理解)
PCR中可以用已经合成的DNA引物来代替RNA引物。这些就是引物的作用
引物就是为了增幅目的DNA而导入的短小DNA片断,在PCR反应中,新合成的DNA是要接在引物上才能继续按照模版DNA复制。引物的设计因需要增幅的序列而不同。举个例子来说,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互补碱基不写了)
那么一般来说,你就要导入以accctc结尾的引物使得增幅继续下去,具体方法和注意事项楼主可以看gee_an大侠的资料。
查了一下测序公司的网页,如果要同定微生物,楼主需要准备如下东东:
1、待测菌体。试管或培养皿都可以,但必须是纯粹的待测菌体,不能含有其他的微生物。
2、提纯的DNA。如果1有致病性或传染性,那么楼主就得自己提纯DNA再交给测序公司。DNA纯度要求可以做PCR。
引物可以做为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点,在细胞外的条件下,只有通过引物,DNA才可以开始进行复制。引物是已知序列的DNA小片段。
聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction) (又称:多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。
它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方。PCR又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。
扩展资料:
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
模板DNA的变性
模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
模板DNA与引 物的退火(复性)
模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
引物的延伸
DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需 2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
参考资料来源:
百度百科-PCR扩增